Siglas para Polymerase Chain Reaction, al español traducido como Reaccion en Cadena de la Polimerasa.
Un poco de historia...La tecnica fue desarrollada por Kary Mullis en 1984, y esta basado en el descubrimiento de un organismo thermofilo, que sobrevive a altas temperaturas. Thermus Aquaticus.
La mayoria de las DNA polimerasa funcionan a baja temperatura, en donde el DNA aun sigue apareado.
En cambio la DNA polimerasa de Thermus Aquaticus, funciona a altas temperaturas (100º C app,) en donde el DNA se denaturaliza, quedando separadas en 2 hebras lineales.
Fue asi entonces, como se le denomino a esta enzima; Taq Polymerase.
Elementos basicos requeridos para efectuar un PCR:1.- El DNA objetivo, el cual se quiere amplificar.
2.- Primers, que se unen a regiones especificas, para que la DNA polimerasa empieze a amplificar desde esa posicion.
3.- Taq Polimerasa (U otra polimerasa que funcione a altas temperaturas, como PFU o Vent), que lleva a cabo la sintesis de la hebra complementaria de DNA, a altas temperaturas.
4.- Desoxinucleotidos, que son como los "bloques de lego" con que la polimerasa construye la nueva cadena.
5.- Ion Magnesio, que actua como cofactor de la DNA polimerasa.
6.- Termociclador, que es un aparato, en donde se lleva a cabo la reacción.
Pasos basicos de un PCR:1.- Denaturacion del DNA, que ocurre a 92 - 96ºC. Aqui se denatura el DNA, y las hebras se separan, quedando 2 hebras simples de DNA lineal.
2.- Alineacion de Primers. Que varia entre los 50 - 65 ºC. Es la temperatura requerida para que los primers se unan a la secuencia objetivo. Formula para calcular temperatura de Alineamiento (Annealing): [ 4x(G+C) + 2x(A+T)] A/T/C/G, son los presentes en el Primer utilizado.
3.-Elongación: Que ocurre a los 72ºC. Aqui se lleva a cabo la adicion de desoxinucleotidos a la cadena, que se origina por la DNA polimerasa, luego del primer.
Como se puede apreciar en la imagen,
este procedimiento se repite muchas veces. Para generar miles de fragmentos de PCR. Al final del proceso la relacion entre los fragmentos originales y los obtenidos por amplificacion es tan baja, que se dice que la muestra esta pura en un 99.99%, con la secuencia amplificada.
Aca una pagina para que jueguen un poco mas con PCR, virtualmente.
Click aca para familiarizarte mas con PCR
Vie Abr 10, 2009 5:51 pm
